醫用熒光定量PCR儀,由熒光定量系統和計算機組成,用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正?;幚韥韽浹a背景熒光的差異。正?;罂梢栽O定域值水平,這就是分析熒光數據的水平。
設備簡介
醫用熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件,構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
優勢
樣品到達域值水平所經歷的循環數稱為Ct值(限制點的循環數)。域值應設定在使指數期的擴增效率為大,這樣可以獲得準確,可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品,線性回歸分析將產生一條標準曲線,可以用來計算未知樣品的濃度。
醫療應用
⑴ 病原體檢測
目前,采用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優點。
如:結核菌基因診斷的意義主要表現在:
a.區分TB與其它分枝桿菌;
b.檢測TB耐藥基因;
c.提高TB的陽性檢出率。
⑵ 產前診斷
到目前為止,人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法治療,只能通過產前監測,減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區基因是一種無創傷性的方法,易為孕婦所接受。
⑶ 藥物療效考核
對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關系。HCV高水平表達,干擾素治療作用不敏感,而HCV低滴度,干擾素作用敏感;在拉米夫定治療過程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發生變異。如PCR技術在HBV檢測中的應用及意義:
a.了解乙肝病毒在體內存在的數量。
b.是否復制。
c.是否傳染,傳染性有多強。
d.是否有必要服藥。
e.肝功能異常改變是否由病毒引起。
f.判斷病人是適合用哪類抗病物。
g.判斷藥物治療的療效。
⑷ 腫瘤基因檢測
盡管腫瘤發病的機理尚未清楚,但相關基因發生突變是致癌性轉變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達增加和突變,在許多腫瘤早期就可以出現。實時熒光定量PCR不但能有效地檢測到基因的突變,而且可以準確檢測癌基因的表達量。目前用此方法進行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細胞性白血病WT1基因、腫瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關的病毒基因等多種基因的表達檢測。隨著與腫瘤相關的新基因的不斷發現,熒光定量PCR技術將會在腫瘤的研究中發揮更大的作用。